【目的】探討自動頂空氣相色譜法測定血液中的乙醇。方法：取一定量的血液樣品，加入叔丁醇作為內標,用頂空自動進樣氣相色譜火焰離子化檢測器進行檢測，以保留時間定性，內標法、峰面積比進行定量分析。結果：乙醇濃度在0.10mg/ml-3.00mg/ml范圍內有好的線性（r=0.9999),檢出限為0.01mg/ml,樣品的加標回收率為97.8%-104.3%,RSD<2.0%。結論:所建立的方法簡便、快速、準確，可用于血液中乙醇含量的檢驗。
乙醇為無色、易燃、易揮發的液體，俗稱酒精，具有特殊芳香味,是各種酒類飲料中的主要成分。乙醇的急性毒害主要表現為對中樞神經系統的抑制作用，乙醇中毒多發生于飲酒。飲酒后駕駛機動車輛，易發生交通意外事故。血液中乙醇含量的檢測可用于乙醇中毒和過量乙醇導致疾病的確認,對車輛駕駛人員血液中乙醇含量檢測的結果可作為判定飲酒后或者醉酒后駕車的依據。
血液中乙醇的測定有化學法、酶法和氣相色譜法等1,其中氣相色譜法（包括直接進樣氣相色譜法和頂空氣相色譜法）是目前較普遍使用的方法卜5],本研究利用乙醇的易揮發性，以叔丁醇為內標，選用DB-ALC1和DB-ALC2血液中酒精分析專用色譜柱，用頂空自動進樣氣相色譜火焰離子化檢測器進行檢測，建立的方法樣品用量少,操作簡便，準確度高，能對血液中的乙醇進行可靠分析。
一、材料與方法
1.儀器與試劑
氣相色譜儀附氫火焰離子化檢測器,頂空自動進樣器（配1ml定量進樣環）,精密移液器。乙醛（1000pg/ml,Ac-cuStandard公司）。甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、叔丁醇均為色譜純。
2.儀器條件
色譜柱:DB-ALC1毛細管色譜柱（30mx0.32mmx1.8pm)、DB-ALC2毛細管色譜柱（30mx0.32mmX1.2pm),色譜條件：柱溫：恒溫40°C,載氣（N)流速3.0ml/min,進樣口溫度：150C,分流比5:1,檢測器溫度:250,氫氣流速:35ml/min,空氣流速:350ml/min，尾吹氣（N2)流速:32ml/min。
頂空自動進樣分析條件：加熱箱溫度65°c，樣品瓶加熱平衡時間10.0min,樣品瓶22ml,不振搖,樣品瓶加壓時間0.10min,加壓平衡時間0.05min,定量環充滿時間0.10min,定量環平衡時間0.05min,定量環溫度105C,傳輸線溫度110C,進樣時間1.00min。
3.標準曲線的制備
用精密移液器分別取0.10ml配制成不同濃度的乙醇標準溶液（0.10mg/ml、0.20mg/ml、0.50mg/ml、 1.00mg/ml、2.00mg/ml、3.00mg/ml)加入預先加有0.50ml叔丁醇內標工作液（濃度為0.04mg/ml)的頂空自動進樣器樣品瓶內，用封蓋器蓋上帶有硅橡膠墊的頂空鉗口蓋，混勻，置于頂空自動進樣器中加熱后測定。以乙醇濃度為橫坐標，乙醇對叔丁醇的峰面積比為縱坐標,繪制標準曲線。
4.樣品測定
用精密移液器分別取0.10ml的空白、0.10ml的樣品血加入預先加有0.50ml叔丁醇內標工作液（濃度為0.04mg/ml)的頂空自動進樣器樣品瓶內，用封蓋器蓋上帶有硅橡膠墊的頂空鉗口蓋，混勻，置于頂空自動進樣器中加熱后測定。以保留時間定性，峰面積比定量。
二、結果與討論
1.采用本法測定血液中的乙醇,樣品用量少，操作簡便，雜質干擾少,基線穩定,所需分析時間短（采用DB-ALC1毛細管柱時，乙醇的保留時間為2.16min,內標物叔丁醇的保留時間為3.12min;采用DB-ALC2毛細管柱時，乙醇的保留時間為2.20min,內標物叔丁醇的保留時間為2.96min),自動化程度高，能滿足日常檢測要求。在血液中乙醇的曰常檢測中，通常采用單一色譜柱就可滿足測定要求，必要時采用DB-ALC1和DB-ALC2雙柱定性，能提高定性分析結果的準確度。
2.線性范圍及檢出限
乙醇濃度在0.10mg/ml~3.00mg/ml范圍內有好的線性,采用DB-ALC2毛細管柱的測定結果見表1,回歸方程為Y=-0.030+1.16X(r=0.9999),其中Y為乙醇對叔丁醇的峰面積比,X為乙醇濃度（mg/ml),方法檢出限為0.01mg/ml。
表1標準測定結果
3.方法的精密度和準確度
空白血中分別加入不同量的乙醇后制成不同濃度的三份樣品，采用DB-ALC2毛細管柱，每份樣品重復測定6次，平均回收率在97.8%~104.3%之間，相對標準偏差RSD在2.0%以下，結果見表2。
表2回收率與精密度試驗結果（n=6)
4.本法可同時分析甲醇、乙醛、乙醇、正丙醇、異丙醇等揮發性物質，這些物質在DB-ALC1和DB-ALC2毛細管柱上均能得到很好的分離，且峰形良好，它們在這兩根柱子上的出峰情況不同，在DB-ALC1毛細管柱上的出峰順序依次為：甲醇、乙醛、乙醇、異丙醇、叔丁醇(內標）、正丙醇；在DB-ALC2毛細管柱上的出峰順序依次為：乙醛、甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇（內標）、正丙醇,相關圖譜見圖1、圖2。
圖2采用DB-ALC2柱得到的色譜圖內標物叔丁醇的作用不僅使定量準確，同時可用于實時監測，空白對照分析中無乙醇的色譜峰而有內標物的色譜峰為正常；分析樣品時，內標物色譜峰正常而無乙醇的色譜峰時，可認為檢驗結果為陰性；如果樣品中未出現內標物的色譜峰，結果無效，應查找原因，重新檢驗。
三、結論
本研究建立的自動頂空氣相色譜法測定血液中的乙醇,方法簡便,準確度高，能滿足血液中乙醇含量的檢驗要求，方法自動化程度高，所需分析時間短，非常適合批量樣品檢驗需求。
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